Hitung Retikulosit

Table of Contents

Retikulosit adalah sel darah merah muda atau remaja yang dilepaskan dari sumsum tulang ke dalam aliran darah dan mengandung sisa-sisa asam ribonukleat (RNA) dan ribosom tetapi tidak memiliki nukleus. Setelah pewarnaan dengan pewarna supravital seperti biru metilen baru, RNA muncul sebagai butiran atau filamen pengendapan biru di dalam sel darah merah. Setelah pewarnaan supravital, setiap sel darah merah yang tidak berinti yang mengandung 2 atau lebih butiran bahan berwarna biru dianggap sebagai retikulosit (The College of American Pathology). Pewarnaan supravital mengacu pada pewarnaan sel dalam keadaan hidup sebelum mereka mati oleh fiksasi atau pengeringan atau dengan berlalunya waktu. Penghitungan retikulosit dilakukan dengan metode manual. Baru-baru ini telah diperkenalkan metode berdasarkan sitometri aliran yang lebih cepat dan lebih tepat. 

Hitung retikulosit dilakukan untuk menilai aktivitas eritropoietik dari sumsum tulang.

 PENGGUNAAN PEMERIKSAAN RETIKULOSIT

1. Sebagai salah satu studi baseline pada anemia tanpa penyebab yang jelas
2. Untuk mendiagnosis anemia karena eritropoiesis yang tidak efektif (kerusakan dini prekursor sel darah merah di sumsum tulang terlihat pada anemia megaloblastik dan talasemia) atau karena penurunan produksi sel darah merah: Pada anemia hipoplastik atau eritropoiesis yang tidak efektif, jumlah retikulosit rendah dibandingkan dengan tingkat anemia. Peningkatan eritropoiesis (misalnya pada anemia hemolitik, kehilangan darah, atau pengobatan khusus anemia gizi) dikaitkan dengan peningkatan jumlah retikulosit. Jadi jumlah retikulosit digunakan untuk membedakan anemia hipoproliferatif dari anemia hiperproliferatif.
3. Untuk menilai respons terhadap terapi khusus pada defisiensi besi dan anemia megaloblastik.
4. Menilai respon terapi eritropoietin pada anemia gagal ginjal kronis.
5. Mengikuti jalannya transplantasi sumsum tulang untuk engraftment
6. Untuk menilai pemulihan dari terapi myelosuppressive
7. Menilai anemia pada neonatus

PRINSIP PEMERIKSAAN RETIKULOSIT

Beberapa tetes darah (dikumpulkan dalam EDTA) diinkubasi dengan larutan biru metilen baru yang menodai butiran RNA dalam sel darah merah. Apusan tipis dibuat pada kaca objek dari campuran dan retikulosit dihitung di bawah mikroskop. Jumlah retikulosit dinyatakan sebagai persentase sel darah merah.

REAGEN

Menyiapkan larutan New methylene blue, caranya sebagai berikut:

• New methylene blue 1.0 gram
• Natrium sitrat 0,6 gram
• Natrium klorida 0,7 gram
• Air suling 100 ml

Reagen harus disimpan di lemari es pada suhu 2-6 ° C dan disaring sebelum digunakan.

Alternatif yang sesuai untuk New methylene blue adalah brilliant cresyl blue dan azure B.

SPESIMEN PEMERIKSAAN RETIKULOSIT

Darah kapiler atau darah vena antikoagulan EDTA dapat digunakan.

METODE PEMERIKSAAN RETIKULOSIT

1. Ambil 2-3 tetes larutan metilen biru baru yang telah disaring dalam tabung reaksi 12 × 75 mm.
2. Tambahkan jumlah darah yang sama dan aduk rata.
3. Simpan campuran pada suhu kamar atau 37 ° C selama 15 menit.
4. Setelah pencampuran lembut, teteskan sedikit dari campuran pada slide kaca, siapkan olesan tipis, dan biarkan mengering di udara.
5. Periksa di bawah mikroskop menggunakan obyektif pencelupan minyak. Sel darah merah yang matang berwarna hijau-biru pucat. Retikulosit menunjukkan endapan biru tua dari butiran halus dan filamen dalam bentuk jaringan (retikulum) (Gbr. 21.1). Sebagian besar retikulosit yang belum matang menunjukkan sejumlah besar bahan yang diendapkan dalam bentuk suatu massa, sedangkan retikulosit yang paling matang hanya menunjukkan beberapa butiran atau untaian. Setiap sel darah merah tidak berinti dianggap sebagai retikulosit jika mengandung 2 atau lebih partikel RNA ribosom bernoda biru.
6. Hitung 1000 sel darah merah dan catat jumlah sel darah merah yang merupakan retikulosit. Kesalahan penghitungan diminimalkan jika ukuran bidang mikroskopis dikurangi. Ini dicapai dengan menggunakan cakram okuler Miller yang dimasukkan ke dalam lensa mata (Gbr. 21.2); itu membagi lapangan menjadi dua kotak (satu berukuran sembilan kali lebih besar dari yang lain). Retikulosit dihitung dalam kotak dan sel darah merah dihitung dalam kotak yang lebih kecil.

Gambar 21.1: Retikulosit diwarnai dengan pewarnaan supravital

Gambar 21.2: Cakram okuler Miller untuk memfasilitasi penghitungan retikulosit. Cakram okuler Miller berisi dua kotak: A dan B. Kotak A 9 kali lebih besar dari kotak B.Kotak B digunakan untuk menghitung sel darah merah, sedangkan retikulosit dihitung dalam kotak A.Hanya retikulosit yang dihitung dalam 20 besar (yaitu A ) kotak, sedangkan sel darah merah dihitung dalam 20 kotak kecil (yaitu B).

Jumlah retikulosit diperoleh dari rumus ; 

                   Total retikulosit dihitung dalam kotak A.

        ——————————————————————   × 100

            Total sel darah merah dihitung dalam persegi B × 9

CARA MELAPORKAN HASIL PEMERIKSAAN RETIKULOSIT

1. Persentase retikulosit: Metode pelaporan yang paling umum adalah persentase retikulosit yang dihitung dari rumus berikut:

Retikulosit                 Jumlah retikulosit dihitung

persentase = ———————————————— × 100

                             Jumlah sel darah merah dihitung

Nilai referensi Retikulosit :  

- pada orang dewasa dan anak-anak ; 0,5% -2,5% 

Jumlah retikulosit lebih tinggi pada bayi baru lahir.

2. Jumlah retikulosit absolut

= Persentase retikulosit × Jumlah sel darah merah

    Normal: 50.000 hingga 85.000 / cmm

3. Jumlah retikulosit terkoreksi (indeks Retikulosit)

                                            PCV pasien

= Persentase retikulosit × ————————

                                             PCV normal

Jumlah retikulosit terkoreksi> 2% menunjukkan pelepasan retikulosit yang sesuai dengan derajat anemia. Jika <2%, pelepasan retikulosit tidak tepat.

(4) Indeks produksi pematangan retikulosit

         Jumlah retikulosit terkoreksi 

= ———————————————

    Perkiraan waktu pematangan dalam beberapa hari

Catatan:

1. Tahapan pematangan retikulosit (Heilmeyer dan Westhaeuser, 1932) (Gbr. 21.3):

Gambar 21.3: Tahapan pematangan retikulosit

• Stadium 0: Normoblas lambat atau ortokromatik (sel darah merah berinti); pewarnaan kuat untuk retikulum (Jenis sel ini tidak boleh dimasukkan dalam retikulosit karena ini bukan tahap pematangan retikulosit)
• Stadium I: Retikulum kohesif padat dalam sel darah merah non-nukleasi (0,1% jumlah retikulosit pada individu normal)
• Stadium II: Jaringan luas retikulum lepas (0,7% jumlah retikulosit pada individu normal)
• Stadium III: Retikulum kecil bersama dengan butiran yang tersebar (32% jumlah retikulosit pada individu normal)
• Stadium IV: Butiran tersebar (61% jumlah retikulosit pada individu normal).

2. Waktu yang dibutuhkan untuk pematangan retikulosit (yaitu dari ekstrusi nukleus hingga tidak ada butiran yang terlihat di sitoplasma) adalah 4 sampai 4,5 hari. Hingga ekstrusi inti, 97% hemoglobin disintesis; retikulosit mensintesis sisa 3%. Retikulosit diproduksi di sumsum tulang di mana mereka menghabiskan waktu sekitar 3 hingga 3,5 hari untuk pematangan. Dalam sirkulasi, mereka menghabiskan 1 hari lagi sebelum menjadi sel darah merah. Pada anemia hemolitik dan setelah kehilangan darah akut, retikulosit dilepaskan secara prematur dalam sirkulasi dimana mereka membutuhkan lebih banyak waktu (sekitar 2-3 hari) untuk pematangan. Retikulosit yang dilepaskan sebelum waktunya lebih besar dari retikulosit yang dilepaskan dalam kondisi basal. Waktu pematangan tergantung pada hematokrit pasien. Oleh karena itu, untuk menghindari perkiraan produksi sel darah merah yang berlebihan, indeks retikulosit dihitung. Pada pasien anemia, jika indeks retikulosit gagal naik 2-3 kali lipat di atas nilai normal, maka harus dicurigai adanya penurunan produksi sel darah merah di sumsum. Waktu pematangan menurut hematokrit adalah sebagai berikut: hematokrit 45%: waktu pematangan 1 hari, 35%: 1,5 hari, 25%: 2 hari, dan 15%: 2,5 hari. Terdapat bukti bahwa pematangan retikulosit juga terjadi secara in vitro setelah pengambilan darah dan oleh karena itu spesimen harus diproses untuk penghitungan retikulosit sesegera mungkin (dalam 4 jam setelah pengambilan).

3. Contoh yang menggambarkan pentingnya jumlah retikulosit absolut dan jumlah retikulosit yang dikoreksi: Seorang pasien pria berusia 30 tahun dengan anemia memiliki PCV 15%, jumlah sel darah merah 1,2 juta hitungan / cmm, dan jumlah retikulosit 3%. Jumlah retikulosit tampaknya meningkat (normal: 0,5-2,5%) menunjukkan respon yang adekuat terhadap anemia. Akan tetapi, nilai hitung retikulosit absolut (0,03 x 1200000) adalah 36,000 dan hitung retikulosit yang dikoreksi adalah 3 x (15/ 45) atau 1%; keduanya lebih rendah dibandingkan dengan derajat anemia. Dengan demikian, produksi sel darah merah di sumsum pasien berkurang (anemia hipoproliferatif).

4. Penyebab peningkatan jumlah retikulosit (retikulositosis):

1. Anemia hemolitik
2. Kehilangan darah
3. Mengikuti terapi spesifik anemia gizi (seperti zat besi pada anemia defisiensi besi, folat pada anemia defisiensi folat, Vit B12 pada anemia defisiensi B12)
4. Hemoglobinopati, misalnya anemia sel sabit.

5. Penyebab penurunan jumlah retikulosit (retikulositopenia):

• Anemia aplastik dan aplasia sel darah merah murni
• Infiltrasi sumsum tulang (leukemia, limfoma, mielofibrosis, keganasan metastasis)
• Penyakit ginjal
• Anemia penyakit kronis
• Alkoholisme
• Miksedema
• Eritropoiesis yang tidak efektif: anemia megaloblastik, anemia sideroblas, talasemia, mielodisplasia
• Setelah transfusi darah.

6. Klasifikasi anemia menurut jumlah retikulosit: Anemia normokromik normositik diklasifikasikan menjadi dua jenis berdasarkan jumlah retikulosit:

• Anemia normokromik normositik dengan peningkatan jumlah retikulosit:

   - Kehilangan darah baru-baru ini

   -Hemolisis

• Anemia normokromik normositik dengan jumlah retikulosit rendah:

   - Anemia aplastik

   - gagal ginjal kronis

    - Anemia penyakit kronis

    - Anemia akibat eritropoiesis yang tidak efektif

7. Retikulosit harus dibedakan dari (Gambar 21.4):

Gambar 21.4: Diferensiasi retikulosit dari badan Howell-Jolly, badan Heinz, dan inklusi HbH

• Badan Heinz: Ini adalah rantai globin yang diendapkan yang melekat pada membran sel darah merah. Berwarna biru muda dan terlihat pada defisiensi glukosa-6-fosfat dehidrogenase setelah terpapar
• stres oksidan.
• Badan Pappenheimer: Ini adalah butiran yang mengandung besi yang muncul sebagai satu atau lebih titik kecil di sel darah merah. Mereka memberikan reaksi biru Prusia yang positif. Mereka bingung dengan retikulosit dalam sediaan Romanowsky-counterstained.
• Inklusi HbH: Bentuknya bulat, seperti bola golf seperti badan inklusi yang terlihat pada α-thalassemia. Mereka terlihat di sebagian besar sel darah merah sementara retikulosit terlihat hanya di beberapa sel.
• Butiran biru metilen baru ditumpangkan pada sel darah merah, jika noda tidak disaring sebelum digunakan.
• Badan Howell-Jolly: Ini adalah sisa-sisa nuklir dalam sel darah merah yang terlihat pada anemia tertentu dan setelah splenektomi. Karena pewarna supravital menodai DNA dan RNA, struktur ini juga ternoda.

8. Sel darah merah polikromatik pada apusan darah bernoda Romanowsky mewakili retikulosit. Namun, hanya stadium 1, 2, dan 3 yang menyebabkan polikromasia, sedangkan retikulosit stadium 4 yang memiliki jumlah RNA sedikit tidak menyebabkan polikromasia. Oleh karena itu, menghitung polikromatik

sel tidak dapat digunakan sebagai pengganti jumlah retikulosit.

NILAI REFERENSI PEMERIKSAAN RETIKULOSIT

• Persentase retikulosit: 0,5-2,5%
• Jumlah retikulosit absolut: 50.000-85.000 / cmm

BIBLIOGRAFI

1. Pierre RV. Reticulocytes: Their usefulness and measurement in peripheral blood. Clin Lab Med
2. 2002;22:63-79.
3. The Expert Panel on Cytometry of the International Council for Standardization in Hematology: ICSH guidelines for reticulocyte counting by microscopy on supravitally stained preparations. World Health Organization. WHO/LBS/92.3 1992.

Baca juga :

1. Estimasi Hemoglobin (HGB/Hb)
2. Packed Cell Volume (PCV)
3. Jumlah Leukosit Total