Denaturasi DNA: Kunci Penting dalam Mengungkap Rahasia Genetik
 |
| Denaturasi DNA. (Foto : elearning.fondation-merieux.org) |
INFOLABMED.COM - Denaturasi DNA adalah proses untuk memutuskan untai ganda DNA menjadi untai tunggal menggunakan agen kimia atau fisik, yang dikenal sebagai denaturasi DNA.
Selama beberapa minggu terakhir, kami telah menjelajahi PCR dan hal terkait yang berkaitan dengan optimisasi.
Sejauh ini, kami telah membahas pentingnya kandungan GC, suhu annealing, protokol qPCR, dan PCR asimetris.
Kami semakin mendalam untuk memahami konsep PCR dan denaturasi dengan lebih tepat, dan itulah mengapa saya pikir topik ini penting untuk dibahas, yaitu denaturasi DNA.
Sintesis DNA in vitro atau in vivo memerlukan berbagai enzim, koenzim, dan primer.
Namun, hal mendasar untuk memulai proses ini adalah memutuskan untai ganda dsDNA menjadi dua untai tunggal.
Bentuk alami DNA setidaknya bagi kita adalah dsDNA, yang merupakan akronim dari DNA dengan untai ganda. Dua untai tunggal DNA dihubungkan oleh ikatan hidrogen dan itulah bentuk stabil DNA!
Ketika kita berbicara tentang sintesis in vivo, selama replikasi, DNA polimerase memerlukan DNA untai tunggal untuk memulai proses replikasi.
Hal yang sama diperlukan untuk proses in vitro seperti PCR, sekuensing DNA, atau mikroarray.
Namun, enzim helikase dapat dengan baik melakukan pekerjaan tersebut selama replikasi, namun hal yang sama tidak mungkin dilakukan untuk studi in vitro.
Enzim tidak dapat bekerja pada suhu yang lebih tinggi atau di luar sel. Tetapi karena ikatan hidrogen cukup kuat untuk mengikat dua untai DNA yang terpisah, kita memerlukan lebih banyak energi untuk memutus atau memisahkan untai tunggal DNA.
Dalam artikel ini, saya akan menjelaskan pentingnya denaturasi DNA dan berbagai teknik untuk melakukannya. Saya harap artikel ini akan membantu Anda dalam PCR dan optimisasi uji lainnya.
Apa itu denaturasi DNA?
Secara umum, proses "denaturasi" atau "penguraian biomolekul" mendorong kehilangan struktur. Misalnya, denaturasi protein atau DNA kehilangan berbagai tingkat struktur.
Denaturasi dan renaturasi adalah fenomena alami yang memungkinkan sintesis asam nukleat baru. Ini berguna dalam studi in vitro juga.
Definisi Denaturasi DNA
Denaturasi DNA yaitu proses di mana DNA dengan untai ganda menjadi DNA dengan untai tunggal menggunakan agen kimia atau fisik.
Pentingnya denaturasi DNA:
Sekarang Anda mungkin bertanya-tanya mengapa kita perlu mendenaturasi DNA?
Mendekaturasi DNA memungkinkan kita untuk mengamplifikasi dan hibridasi DNA dalam berbagai uji hilir. Dan membantu dalam studi biologi.
Dengan mendenaturasi DNA, stabilitas, sifat-sifat, variasi struktural, variasi sekuens, konsentrasi, ekspresi, dan sekuens nukleotida DNA dapat dipelajari dan diselidiki.
Amplifikasi membantu dalam mempelajari mutasi dan menyelidiki berbagai gangguan genetik dan genetika, sementara hibridasi membantu dalam mempelajari dan menyelidiki ekspresi gen dan studi terkait.
Variasi sekuens juga dapat diidentifikasi menggunakan uji berbasis denaturasi, dan oleh karena itu kita dapat mengatakan bahwa seluruh studi genetika dan genomik bergantung pada proses denaturasi.
Ini adalah langkah penting dalam PCR, sekuensing DNA, dan studi mikroarray DNA.
Mekanisme denaturasi DNA:
Proses denaturasi memutuskan dua untai DNA antiparalel menggunakan agen kimia atau fisik.
DNA memiliki empat basa A, T, G, dan C. A dan T dihubungkan oleh dua ikatan hidrogen dan G dan C dihubungkan oleh tiga ikatan hidrogen.
Agen denaturasi memutus ikatan hidrogen antara dua untai dan menghambat renaturasi sementara atau permanen.
Namun, perlu diingat bahwa denaturasi tidak dapat memengaruhi atau memutus ikatan fosfodiester antara nukleotida yang berdekatan.
Daftar agen denaturasi DNA:
- Agen fisik: Panas, sinar UV, tekanan tinggi, sonikasi, dan tindakan permukaan.
- Agen kimia: Asam, alkali, logam berat, DMSO, NaOH, deterjen guanidin, garam urea. Formamida, DMSO, Guanidin, natrium salisilat, propilen glikol, urea, dan NaOH.
Aplikasi denaturasi DNA:
Banyak uji berbeda menggunakan "proses" denaturasi DNA untuk berbagai tujuan dan studi.
- PCR: Dalam PCR, ini membantu dalam menyelidiki mutasi dan membedakan alel.
- Sekuensing DNA: Sekuensing DNA memisahkan polinukleotida yang berbeda berdasarkan variasi sekuens.
- Mikroarray DNA: Denaturasi mempromosikan hibridisasi probe dan membantu dalam studi ekspresi gen.
- Blotting Southern: Denaturasi memungkinkan pengikatan probe untuk memvalidasi keberadaan atau ketiadaan sekuens nukleotida.
- Elektroforesis gel agarosa: Denaturasi memungkinkan migrasi ssDNA dengan mudah di gel dan membantu menentukan ukuran DNA, terutama dalam PAGE.
Denaturasi DNA memiliki pentingnya dalam aplikasi hilir, namun, untuk mendapatkan hasil yang baik, DNA harus benar-benar terdenaturasi.
Selain panas, agen denaturasi umum adalah NaOH, yang bekerja dengan mengubah pH DNA.***
Sumber: Genetic Education
Ikuti berita terkini dengan mengikuti kami di Google News atau klik tautan ini Google News INFOLABMED.
Post a Comment