Cara Kerja Pewarnaan BTA: Prinsip dan Prosedur Metode Ziehl-Neelsen untuk Deteksi Tuberkulosis

Table of Contents

 

INFOLABMED.COM - Pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) adalah metode esensial dalam diagnostik mikrobiologi, khususnya untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis, agen penyebab tuberkulosis (TB) . Metode ini memungkinkan identifikasi cepat bakteri tahan asam dalam sampel klinis, seperti dahak . Cara kerja pewarnaan BTA didasarkan pada kemampuan dinding sel bakteri tertentu untuk mempertahankan pewarna meskipun telah dicuci dengan larutan asam-alkohol .

Prinsip Dasar Pewarnaan BTA

Prinsip utama pewarnaan BTA terletak pada asam mikolat, yaitu lapisan lilin yang terdapat pada dinding sel bakteri tertentu, terutama Mycobacterium . Lapisan lilin ini membuat dinding sel bakteri bersifat hidrofobik dan impermeabel terhadap pewarna konvensional seperti pada pewarnaan Gram .

Metode Ziehl-Neelsen menggunakan karbol fuchsin sebagai pewarna utama. Zat ini bersifat fenolik yang membantu melarutkan lapisan lipid pada dinding sel, memungkinkan pewarna masuk ke dalam sel .

Komponen Kunci Pewarnaan BTA

Tahap	Reagen	Fungsi
Pewarna Primer	Karbol Fuchsin	Pewarna merah yang menembus dinding sel bakteri
Dekolorisasi	Asam-Alkohol	Menghilangkan pewarna dari bakteri non-tahan asam
Counterstain	Metilen Biru	Memberi warna biru pada bakteri yang tidak tahan asam

Prosedur Pewarnaan BTA Metode Ziehl-Neelsen

Berikut adalah langkah-langkah cara kerja pewarnaan BTA dengan metode Ziehl-Neelsen :

1. Pembuatan dan Fiksasi Sediaan

Langkah	Deskripsi
Buat apusan tipis	Ambil sampel dahak, buat apusan tipis di atas kaca objek, dan keringkan di udara
Fiksasi panas	Panaskan sediaan dengan melewatkannya di atas api Bunsen sebanyak 3-4 kali untuk menempelkan bakteri pada kaca objek

2. Pewarnaan Primer dengan Karbol Fuchsin

Langkah	Deskripsi
Aplikasi pewarna	Teteskan larutan karbol fuchsin hingga menutupi seluruh sediaan
Pemanasan	Panaskan sediaan hingga timbul uap (tidak sampai mendidih) selama 5-10 menit untuk membantu pewarna menembus dinding sel yang mengandung lilin
Pendinginan	Biarkan sediaan dingin selama 1-2 menit
Pembilasan	Bilas dengan air mengalir

3. Dekolorisasi dengan Asam-Alkohol

Langkah	Deskripsi
Aplikasi dekolorisasi	Teteskan larutan asam-alkohol (HCl 1% dalam alkohol 70%) hingga pewarna merah hampir hilang dari sediaan (sekitar 10-20 detik)
Pembilasan	Bilas dengan air mengalir

4. Pewarnaan Penunjang dengan Metilen Biru

Langkah	Deskripsi
Aplikasi counterstain	Teteskan larutan metilen biru 0.1-1%, biarkan selama 30-60 detik
Pembilasan dan pengeringan	Bilas dengan air, keringkan, dan sediaan siap diamati

Interpretasi Hasil Pewarnaan BTA

Warna yang Terlihat	Interpretasi
Basil merah dengan latar biru	Bakteri Tahan Asam (BTA positif) — ditemukan Mycobacterium tuberculosis atau bakteri tahan asam lainnya
Hanya warna biru	Tidak ada bakteri tahan asam (BTA negatif) — bakteri non-tahan asam berwarna biru

Pelaporan Hasil BTA

Hasil pewarnaan BTA dilaporkan secara semikuantitatif berdasarkan jumlah basil yang terlihat per lapangan pandang mikroskop (perbesaran 1000x dengan minyak emersi) :

Hasil	Kriteria
Negatif	0 BTA per 100 lapangan pandang
Jumlah dilaporkan	1-2 per 300 lapangan pandang
1+	1-9 per 100 lapangan pandang
2+	1-9 per 10 lapangan pandang
3+	1-9 per lapangan pandang
4+	>9 per lapangan pandang

Kesimpulan

Cara kerja pewarnaan BTA didasarkan pada sifat unik dinding sel Mycobacterium tuberculosis yang mengandung asam mikolat (lapisan lilin). Metode Ziehl-Neelsen menggunakan karbol fuchsin dengan pemanasan untuk menembus lapisan lilin, kemudian dekolorisasi dengan asam-alkohol untuk membersihkan bakteri non-tahan asam, dan diakhiri dengan counterstain metilen biru. Hasilnya, bakteri tahan asam tampak merah dengan latar belakang biru . Pewarnaan BTA tetap menjadi metode skrining utama untuk diagnosis tuberkulosis, terutama di negara berkembang karena murah, cepat, dan cukup sensitif .

Follow Media Sosial Infolabmed.com melalui chanel Telegram [Link : https://t.me/infolabmedcom], Facebook [Link : https://www.facebook.com/infolabmed/], Twitter/X [Link : https://x.com/infolabmed]. Berikan DONASI terbaikmu untuk perkembangan website infolabmed.com melalui Donasi via DANA https://link.dana.id/minta?full_url=https://qr.dana.id/v1/281012012020092524655592.