Southern Blotting: Teknik Analisis DNA untuk Diagnosis Kelainan Genetik
Table of Contents
INFOLABMED.COM - Southern blotting adalah teknik laboratorium yang dikembangkan oleh Edwin Southern pada tahun 1975 untuk menganalisis struktur dan mutasi DNA.
Meskipun kini jarang digunakan karena adanya teknologi PCR, metode ini pernah menjadi revolusioner dalam diagnosis kelainan genetik.
Baca juga : Denaturasi DNA: Kunci Penting dalam Mengungkap Rahasia Genetik
Prinsip Dasar Southern Blotting
Teknik ini memanfaatkan sifat alami DNA:
- Pemisahan DNA dengan elektroforesis gel
- Transfer DNA ke membran nitroselulosa (blotting)
- Hibridisasi menggunakan probe DNA berlabel
- Deteksi sekuens DNA spesifik
Prosedur Southern Blotting
- Sampel: Darah EDTA (hindari heparin jika mungkin perlu PCR)
- Langkah-langkah:
- Ekstraksi dan pemotongan DNA dengan enzim restriksi
- Pemisahan fragmen berdasarkan ukuran via elektroforesis
- Transfer DNA ke membran (blotting)
- Hibridisasi dengan probe radioaktif/biotin
- Visualisasi pita DNA target
Kegunaan Southern Blotting
- Diagnosis kelainan gen tunggal (misalnya thalassemia, sickle cell)
- Analisis rearrangement gen (contoh: limfoma)
- Studi polimorfisme DNA
- Konfirmasi transgenik pada penelitian
Kelebihan vs Keterbatasan
| Kelebihan | Keterbatasan |
|---|---|
| Spesifisitas tinggi | Proses lama (3-7 hari) |
| Tidak memerlukan PCR | Butuh DNA dalam jumlah besar |
| Dapat analisis gen besar | Kurang sensitif dibanding PCR |
Baca juga : Molecular Tests for Diagnosis of Thalassaemia: Metode dan Pentingnya Analisis DNA
Perbandingan dengan Teknik Modern
- PCR: Lebih cepat, butuh sedikit DNA, tapi terbatas pada gen kecil
- Sequencing: Lebih komprehensif tapi mahal
- Southern blotting tetap berguna untuk kasus tertentu seperti analisis tandem repeat
- Kimball’s Biology Pages. Gel blotting. M http://www.biology-pages.info/G/GelBlotting.html.
- Southern EM. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electro-phoresis. J Mol Biol 1975; 98: 503–17 (3 Southern’s classic paper and probably the most cited molecular biology paper ever).
- Thermo Fisher Scientific. Southern blotting. M https://www.thermofisher.com/uk/en/home/life-
science/dna-rna-purification-analysis/nucleic-acid-gel-electrophoresis/southern-blotting.html#.
Artikel ini hanya untuk tujuan informasi. Untuk nasihat atau diagnosis medis, konsultasikan dengan profesional.***
Post a Comment