Teknik Pewarnaan Sederhana untuk Mengamati Bakteri

Table of Contents

 

Foto : microrao.com

INFOLABMED.COM - Bakteri merupakan organisme mikroskopis yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. 

Meskipun dapat terlihat dalam preparat yang tidak diwarnai seperti mount basah atau preparasi tetesan gantung, morfologinya tidak jelas. 

Bakteri tidak berwarna dan saat terlarut dalam saline, mereka tidak menawarkan kontras apa pun. 

Selain itu, motilitas bakteri membuatnya sulit untuk mengamati morfologi dengan jelas. Oleh karena itu, bakteri harus diwarnai untuk diamati. 

Zat pewarna yang sering digunakan adalah bahan kimia beracun yang membunuh bakteri. Proses pengolesan, penstabilan, dan pengeringan seringkali membunuh bakteri.

 Proses ini memperbaiki bakteri ke slide dan posisi mereka di slide tetap tidak berubah.

Persiapan Smear

Sebuah slide kaca bebas lemak diambil dan lingkaran ditandai di salah satu sisi slide menggunakan pensil lilin atau pena penanda kaca. 

Penandaan pada slide membuatnya mudah untuk mengidentifikasi permukaan slide yang berisi smear. 

Di sisi yang berlawanan, tetesan kecil saline steril diambil. Saline juga dapat ditransfer menggunakan lingkaran bakteriologi.

Sebagian kecil koloni diambil menggunakan kawat lurus steril dan diemulsikan dengan baik dalam saline di slide. 

Koloni disebarkan secara merata di dalam area lingkaran untuk menghasilkan smear. Kehadiran lemak pada slide akan mencegah distribusi yang merata yang menghasilkan smear yang tidak merata. Mengambil terlalu banyak koloni akan menghasilkan smear yang terlalu tebal. 

Demikian pula, mengambil bagian koloni yang sangat kecil membuatnya sangat sulit untuk mencari bakteri. 

Setelah smear yang merata disiapkan, harus dikeringkan udara. Smear harus dipegang di atas api Bunsen pada ketinggian yang nyaman. 

Smear tidak boleh dikeringkan dengan paksa dengan menggunakan panas. Setelah smear mengering, itu diperbaiki. 

Smear dapat diperbaiki secara fisik atau kimia. Fiksatif kimia tidak berguna untuk studi bakteriologi reguler. 

Sangat nyaman untuk memperbaiki smear dengan panas dengan lembut melewati slide melalui api Bunsen sekali atau dua kali. Pemanasan berlebihan slide harus dihindari dengan tegas.

Catatan: Anda tidak perlu menyiapkan smear, slide yang berisi smear akan disediakan kepada Anda dalam kelas praktis.

Persyaratan

Smear pada slide kaca, rak pewarnaan, larutan pewarnaan, kertas blotting, minyak perendam, dan mikroskop.

Pewarnaan

Ada beberapa zat pewarna yang dapat digunakan untuk mewarnai bakteri. Teknik pewarnaan sederhana menggunakan zat pewarna dasar tunggal seperti kristal violet, metilen biru, fuchsine dasar, dll. 

Semua bakteri menyerap zat pewarna dasar secara merata dan muncul dalam warna yang sama. Hanya morfologi bakteri yang dapat dihargai setelah diwarnai.

Kami menggunakan dua larutan pewarnaan sederhana, yaitu larutan kristal violet dan larutan fuchsin karbol encer. 

Kami menggunakan yang pertama untuk mendemonstrasikan kokus dan yang terakhir untuk mendemonstrasikan basil. 

Pilihan ini tidak wajib tetapi digunakan oleh konvensi. Slide dengan kokus dalam smear akan ditandai 'C' dan yang dengan basil akan ditandai 'B' hanya untuk menghindari pencampuran dua slide.

Slide yang ditandai 'C' ditempatkan di rak pewarnaan di atas wastafel. Beberapa tetes larutan kristal violet dituangkan di atas smear cukup untuk menutupi area yang dilingkari. 

Perhatian harus diberikan agar tidak membanjiri slide, yang akan menjadi pemborosan larutan pewarnaan. Pewarnaan harus dibiarkan tetap di smear selama satu menit. 

Slide kemudian diangkat dari rak, dimiringkan untuk menjalankan pewarna ke wastafel, dan kemudian dicuci di bawah aliran air keran yang lembut. 

Botol pencuci juga dapat digunakan untuk tujuan yang sama. Slide harus dipegang dalam posisi miring dan aliran air harus jatuh pada slide sedikit di atas smear. 

Air tidak boleh diizinkan jatuh langsung pada smear karena ada kemungkinan seluruh smear akan tercuci. 

Setelah smear cukup dicuci, itu ditempatkan di atas selembar kertas blotting. Sisi kertas kemudian dilipat di atas slide dan tekanan lembut diberikan untuk mengeringkan slide. 

Tekanan berlebih atau mengelap kertas di atas slide mungkin benar-benar menghapus smear.

Prosedur pewarnaan untuk slide yang ditandai 'B' mirip dengan prosedur yang disebutkan di atas kecuali bahwa larutan pewarnaan yang akan digunakan adalah fuchsin karbol encer dan waktu kontak hanya 30 detik.

Setelah slide kering, tetes minyak cedar (atau parafin cair) ditempatkan di atas smear. Slide ditempatkan pada panggung mekanis dan bagian smear dipusatkan di atas kondensor. 

Mikroskop disesuaikan untuk dilihat di bawah objektif perendaman minyak (100x) dengan mengangkat kondensor sepenuhnya, membuka diafragma sepenuhnya, dan menggunakan cermin datar. Hal ini memastikan bahwa cahaya maksimum tersedia. 

Panggung dinaikkan (atau tubuh optik diturunkan; tergantung pada jenis mikroskop) menggunakan penyesuaian kasar sampai objektif perendaman minyak menyentuh minyak. 

Ini kemudian difokuskan dengan penyesuaian halus sampai gambar yang jelas muncul. Daerah bulat kecil smear yang terlihat melalui lensa disebut lapangan.

Pengamatan untuk slide yang ditandai 'C' yang diwarnai dengan larutan kristal violet:

Bakteri berwarna ungu, berbentuk bulat, yang disusun dalam tunggal, pasangan, tetrads, rantai pendek, dan kelompok seperti anggur yang tidak teratur terlihat.

Inferensi: Slide yang diberikan mengandung

salah satu kokus.

Pengamatan untuk slide yang ditandai 'B' yang diwarnai dengan larutan fuchsin karbol encer:

Bakteri berbentuk batang berwarna merah muda, yang hadir secara sembarangan (tanpa pengaturan karakteristik) terlihat.

Inferensi: Slide yang diberikan mengandung salah satu basil.***