Pewarnaan Endospora - Prinsip, Metode dan Prosedur Pemeriksaannya

Table of Contents

 

Hasil pewarnaan Endospora. (Foto : Tangkapan layar youtube Vishal Boir)

INFOLABMED.COM - Pewarnaan endospora adalah teknik yang penting dalam dunia mikrobiologi untuk mengidentifikasi bakteri yang mampu membentuk endospora. 

Teknik ini memungkinkan pemisahan antara sel vegetatif dan endospora, yang memiliki karakteristik berbeda dalam mikroskop. 

Sejarah Pewarnaan Endospora

Pada tahun 1922, Dorner mempublikasikan serangkaian petunjuk pewarnaan yang mengarah pada penemuan teknik pewarnaan diferensial yang disebut pewarnaan endospora. 

Teknik ini membuat sel vegetatif tampak berwarna merah kekuningan dan endospora tampak hijau di bawah mikroskop cahaya. 

Metode Dorner menggunakan panas sebagai tahap, tetapi karena membutuhkan waktu yang cukup lama, Schaeffer dan Fulton mengubahnya pada tahun 1933.

Prinsip Pewarnaan Endospora

Beberapa bakteri membentuk endospora bakterial sebagai mekanisme pertahanan terhadap faktor lingkungan yang tidak menguntungkan. 

Endospora ini berada dalam keadaan metabolik dorman dan sangat tahan terhadap kondisi eksternal yang tidak sesuai.

 Prinsip dasar pewarnaan endospora melibatkan penggunaan malachite green sebagai pewarna primer yang dipanaskan untuk memaksa pewarnaan masuk ke dalam endospora. 

Sel vegetatif kemudian diwarnai kembali dengan safranin setelah proses pewarnaan, sehingga endospora akan tampak berwarna hijau gelap dan sel vegetatif akan berwarna merah muda.

Metode Pewarnaan Endospora Schaeffer-Fulton

Metode pewarnaan endospora Schaeffer-Fulton adalah salah satu metode yang paling sederhana dan umum digunakan dalam laboratorium mikrobiologi dasar. 

Pewarna malachite green, yang larut dalam air dengan rentang pH alkalin 11-12, dikombinasikan dengan panas uap untuk memudahkan penetrasi pewarna ke dalam endospora.

Penggunaan panas uap sangat penting untuk memungkinkan pewarnaan masuk ke dalam endospora karena malachite green hanya melekat lemah pada endospora dan mudah tercuci jika dibilas dengan air tanpa proses penguatan.

 Sel vegetatif yang telah terdecolorisasi kemudian diwarnai kembali dengan safranin sebagai pewarna sekunder.

Prosedur Pewarnaan Endospora

1. Siapkan preparat gelas dengan cara membersihkan slide kaca dan meneteskan dua tetes air steril menggunakan lingkaran inokulasi.
2. Oleskan kultur bakteri pada tetes air dan biarkan kering secara alami.
3. Panaskan preparat yang telah kering dengan melalui api biru beberapa kali tanpa membakar sisi yang mengandung bakteri.
4. Tutup coretan dengan kertas serap dan letakkan slide di atas rak pewarnaan yang dilengkapi dengan wadah uap atau bak air.
5. Pewarna malachite green diaplikasikan dan dipanaskan selama tiga hingga lima menit.
6. Setelah proses pewarnaan, bilas slide dengan hati-hati untuk menghilangkan pewarnaan yang berlebihan.
7. Tambahkan pewarna kontra safranin dan bilas slide hingga bersih.
8. Keringkan slide sebelum dilihat di bawah mikroskop dengan lensa pembesaran minyak pada 1000x.

Aplikasi Pewarnaan Endospora

• Untuk deteksi bakteri Firmicutes seperti Bacillus spp. dan Clostridium spp.
• Untuk membedakan antara bakteri yang membentuk spora dan yang vegetatif dengan mengidentifikasi bakteri yang memproduksi endospora dalam sampel.

Kelebihan dan Kekurangan Pewarnaan Endospora

Kelebihan:

• Memungkinkan identifikasi bakteri yang memproduksi endospora secara spesifik.
• Memungkinkan deteksi dan keberadaan bentuk vegetatif dalam kultur bakteri.

  Kekurangan:

• Hanya dapat mendeteksi keberadaan bakteri yang membentuk endospora secara khusus.

Dengan demikian, pewarnaan endospora adalah teknik yang penting dalam mikrobiologi untuk membedakan antara sel vegetatif dan endospora serta mengidentifikasi bakteri yang membentuk endospora dalam sampel.