Panduan Lengkap untuk Membuat TAE Buffer (Tris-Asetat-EDTA)

Table of Contents

 

Ilustrasi Pembuatan TAE Buffer. (Foto : ThoughtCo)

INFOLABMED.COM - TAE buffer atau Tris-asetat-EDTA adalah salah satu jenis buffer yang paling umum digunakan dalam elektroforesis agarosa DNA dan RNA. 

TAE buffer dikembangkan oleh berbagai kelompok penelitian pada awal tahun 1970-an.

 Buffer ini memiliki kapasitas buffering yang lebih rendah dibandingkan dengan TBE (Tris-borat-EDTA), namun dapat menjalankan asam nukleat dengan lebih cepat, sehingga menjadi pilihan utama dalam elektroforesis. TAE umumnya disiapkan sebagai larutan 50X dengan pH 8.5.

Aplikasi TAE Buffer 

TAE buffer banyak digunakan dalam berbagai metode berbasis DNA dan RNA menggunakan elektroforesis agarosa, seperti:

• Pemetaan enzim restriksi.
• Konfirmasi peta plasmid.
• Memeriksa produk PCR (reaksi rantai polimerase) dan pemisahan amplicon ukuran yangbenar.
• Kuantifikasi campuran DNA.

Komposisi TAE Buffer

Reagent	Molecular weight	1X TAE molarity	50X TAE molarity	Add for 500ml of 50X TAE	Add for 1L of 50X TAE
Tris Base	121.14 g/mol	40 mM	2 M	121.1 g	242.2 g
Acetic Acid (glacial)	60.5 g/mol	20 mM	1 M	30.25 ml	60.5 ml
EDTA Sodium salt dihydrate	372.24 g/mol	1 mM	50 mM	9.3 g	18.6 g

Catatan: Asam Asetat glasial adalah istilah yang digunakan untuk menyebutkan asam asetat yang memiliki jumlah air yang sangat sedikit di dalamnya (kurang dari 1%).

pH

Tidak perlu menyesuaikan pH buffer. Menambahkan komponen dalam jumlah yang ditentukan membawa pH mendekati 8.5.

Persiapan dalam Pembuatan TAE Buffer

Berikut langkah-langkah untuk membuat TAE buffer:

1. Tambahkan komponen dalam setengah volume ddH2O yang dituju untuk volume.
2. Letakkan beaker di pengaduk magnetik dengan magnet.
3. EDTA larut sangat lambat, jadi santai dan minum kopi.
4. Setelah semua komponen larut, tambahkan volume dengan ddH2O yang dituju.
5. Sekarang Anda memiliki TAE 50X.
6. Untuk membuat 1X TAE dari stok 50X, tambahkan satu bagian 50X TAE ke 49 bagian ddH2O.

Penyimpanan

Simpan TAE buffer pada suhu ruangan.***