Eksplore Dunia Mikro: Memahami Bakteri melalui Teknik Staining Flagella

Table of Contents

 

Pewarnaan Flagella. (Foto : CDC)

INFOLABMED.COM - Flagella, struktur berbentuk seperti cambuk yang ada pada banyak bakteri, merupakan bagian penting dalam mobilitas mikroorganisme. 

Meskipun ukurannya sangat kecil, flagella dapat dideteksi melalui mikroskop cahaya. Untuk meningkatkan visibilitas flagella, berbagai metode pewarnaan telah dikembangkan. 

Metode pertama, yang dikembangkan oleh Leifson (1951) dan Clark (1976), menggunakan campuran larutan natrium klorida, asam tanat, pararosanilin, dan etanol. 

Sedangkan metode kedua, yang diajukan oleh Heimbrook et al. (1989), memanfaatkan larutan asam tanat, fenol, kalium aluminium sulfat, dan kristal violet. 

Kedua metode ini telah terbukti berhasil dalam menghasilkan gambaran yang jelas tentang struktur flagella bakteri, membantu peneliti dalam memahami sifat dan perilaku mikroorganisme. 

Dengan pemahaman yang lebih baik tentang flagella, penelitian mikrobiologi dapat berkembang lebih jauh untuk mengungkap misteri kehidupan mikro yang menarik.

Metode pewarnaan Flagella menurut Leifson (1951) atau Clark (1976)

• Persiapkan larutan 1,5 g natrium klorida dalam 100 ml air suling (larutan A).
• Persiapkan larutan 3,0 g asam tanat dalam 300 ml air suling (larutan B).
• Persiapkan larutan 0,9 g pararosanilin dan 0,3 g pararosanilin hidroklorida dalam 100 ml etanol 95% (larutan C).
• Campur volume yang sama dari larutan A dan larutan B.
• Ambil dua volume dari campuran ini (A+B) dan tambahkan satu volume larutan C.
• Larutan pewarna yang dicampur dapat digunakan selama beberapa minggu, tetapi penggunaan segera lebih disarankan.
• Siapkan slide mikroskop yang telah dikeringkan udara dengan area bakteri yang terpasang.
• Gunakan pensil lilin untuk menggambar garis di sekitar bakteri.
• Isi bagian dalam yang dilingkari oleh garis lilin dengan larutan pewarna.
• Biarkan larutan pewarna selama 5–10 menit, waktu optimal harus ditentukan secara eksperimental.
• Amati larutan pewarna sampai film keemasan terbentuk di permukaan dan endapan terbentuk di dalam larutan pewarna.
• Ambil slide dan bilas dengan lembut dengan aliran air keran yang tidak langsung.
• Keringkan udara, aplikasikan penutup slide, dan periksa. Flagela seharusnya berwarna merah.

Metode Pewarnaan Flagela menurut Heimbrook et al. (1989)

Pewarnaan Flagella menurut Heimbrook et al. (1989)  dapat digunakan dalam suspensi dan telah berhasil digunakan selama bertahun-tahun dalam kursus praktis untuk mahasiswa.

• Persiapkan larutan yang terdiri dari 2% asam tanat dalam 10 ml fenol air 5% dan 10 ml kalium aluminium sulfat jenuh (larutan A).
• Siapkan larutan kristal violet jenuh dalam etanol 95% (larutan B).
• Ambil 10 volume larutan A dan 1 volume larutan B, campur dan saring dengan filter 0,2 μm.
• Isi satu suntikan 1 ml dengan larutan pewarna.
• Letakkan tetesan (5 atau 10 μl) suspensi bakteri di atas slide mikroskop.
• Aplikasikan penutup slide.
• Biarkan selama 5–10 menit.
• Di pinggir penutup slide, letakkan tetesan kecil larutan pewarna; pewarna akan merambat di bawah penutup slide. Atau, rendam dengan meletakkan kertas saring di sisi yang berlawanan dari penutup slide.
• Tunggu selama 5 menit dan periksa mulai dari tepi penutup slide tempat pewarna ditempatkan.

Dua metode ini memberikan pandangan yang indah tentang struktur flagela bakteri, membantu ilmuwan mikrobiologi dalam penelitian mereka yang mendalam. 

Semoga informasi ini membantu Anda dalam memahami lebih lanjut tentang dunia mikroorganisme yang menarik ini.***