Pewarnaan Pada Sel Bakteri: Jenis-Jenis Pewarnaan dan Cara Cepat Menentukan Bentuk, Ukuran, dan Susunan Sel Mikroba

Table of Contents

 

Foto : mybiologydictionary.com

INFOLABMED.COM - Pewarnaan sederhana dapat digunakan untuk menentukan bentuk, ukuran, dan susunan sel. 

Sesuai dengan namanya, pewarnaan sederhana adalah prosedur pewarnaan yang sangat sederhana, melibatkan hanya satu pewarna. 

Anda dapat memilih antara metilen biru, safranin Gram, dan kristal violet Gram.

Pewarnaan dasar seperti metilen biru, safranin Gram, atau kristal violet Gram berguna untuk mewarnai sebagian besar bakteri. 

Pewarna-pewarna ini dengan mudah melepaskan ion hidroksida atau menerima ion hidrogen, yang membuat pewarna bermuatan positif. 

Karena permukaan sebagian besar sel bakteri bermuatan negatif, pewarna-pewarna positif ini dengan mudah melekat pada permukaan sel.

Untuk memudahkan Anda dalam memahami pewarnaan sederhana ini, kami membuat catatan untuk Anda berikut ini.

Pewarnaan Sederhana

1. Lakukan apusan bakteri, seperti yang telah diajarkan kepada Anda baik di tempat kuliah atau tempat Anda bekerja saat ini.
2. genangi apusan dengan pewarna dasar selama sekitar 1 menit. Anda dapat menggunakan kristal violet, safranin, atau metilen biru.
3. Bilas lembut slide dengan air.
4. Keringkan slide dengan hati-hati menggunakan kertas bibulous.
5. Amati slide di bawah mikroskop, menggunakan teknik mikroskop yang benar.

Pewarnaan Negatif: Untuk Menentukan Morfologi Sel Organisme

Pewarnaan negatif adalah cara yang sangat baik untuk menentukan morfologi sel organisme.

 Karena sel itu sendiri tidak diwarnai, morfologi mereka tidak terdistorsi dengan cara apa pun. 

Nigrosin memberikan latar belakang gelap yang membuat bentuk sel yang tidak berwarna terlihat dengan jelas.

Langkah-langkah Pada Pewarnaan Negatif

• Teteskan satu tetes nigrosin pada slide mikroskop yang bersih, berdampingan dengan tepi berembun.
• Dengan teknik steril, ambil sejumlah organisme dari tabung atau lempeng Anda dan campurkan ke dalam tetes nigrosin. Pastikan tidak ada gumpalan besar organisme, tetapi hindari penyebaran tetesan.
• Letakkan ujung slide mikroskop bersih pada sudut slide yang berisi organisme dan ratakan tetesan menjadi lapisan tipis dengan menggunakan aksi kapiler pewarna/slide mikroskop.

• Biarkan lapisan mengering udara.
• Amati slide di bawah mikroskop, menggunakan teknik mikroskop yang benar.

Pewarnaan Gram:  Untuk Identifikasi Jenis Bakteri

1. Lakukan apusan bakteri.
2. Genangi apusan dengan kristal violet selama 1 menit.
3. Bilas lembut slide dengan air.
4. Genangi apusan dengan iodin selama 1 menit.
5. Bilas lembut slide dengan air.
6. Decolorize dengan dekolorisator Gram (aseton/alkohol) selama 3-5 detik SAJA; jika dekolorisator dibiarkan terlalu lama, itu akan memudarkan kristal violet dari sel bakteri Gram positif!
7. Bilas lembut slide dengan air.
8. Rendam dengan safranin selama 1 menit.
9. Bilas lembut slide dengan air.
10. Keringkan slide dengan hati-hati menggunakan kertas bibulous.
11. Amati slide di bawah mikroskop, menggunakan teknik mikroskop yang benar.

Dengan teknik pewarnaan yang tepat... bakteri Gram positif akan berwarna ungu. Bakteri Gram negatif akan berwarna merah/pink.

Tips: Saat membuat sapuan dari organisme yang tidak diketahui untuk pewarnaan Gram, letakkan tiga organisme pada slide Anda: bakteri Gram positif yang diketahui, bakteri Gram negatif yang diketahui, dan organisme yang tidak diketahui (DAN LABEL mana yang mana!). Dengan cara ini, jika ada masalah dengan teknik pewarnaan Anda, itu akan tercermin pada organisme yang diketahui, dan Anda akan tahu Anda perlu melakukan pewarnaan lagi untuk mendapatkan hasil yang akurat.

Pewarnaan Kapsul: Mengungkap Keberadaan Kapsul Bakteri

1. Teteskan satu tetes tinta India pada slide mikroskop yang bersih, berdampingan dengan tepi berembun.
2. Dengan teknik steril, ambil sejumlah K. pneumoniae (atau organisme yang ingin Anda warnai) dari tabung atau lempeng Anda dan campurkan ke dalam tetes tinta India. Pastikan tidak ada gumpalan besar organisme, tetapi hindari penyebaran tetesan.
3. Letakkan ujung slide mikroskop bersih pada sudut slide yang berisi organisme dan ratakan tetesan menjadi lapisan tipis dengan menggunakan aksi kapiler pewarna/slide mikroskop.
4. Biarkan lapisan mengering udara. JANGAN dipanaskan atau dikeringkan dengan blotting!!!! Panas akan melelehkan kapsul!
5. Jenuhkan slide dengan kristal violet selama 1 menit.
6. Bilas lembut slide dengan air.
7. Biarkan slide mengering udara. JANGAN dipanaskan atau dikeringkan dengan blotting!!!! Panas akan melelehkan kapsul!
8. Amati slide di bawah mikroskop, menggunakan teknik mikroskop yang benar. Latar belakang akan gelap. Sel bakteri akan berwarna ungu. Kapsul (jika ada) akan terlihat jelas terhadap latar belakang gelap.

Tips: Jika Anda mewarnai organisme yang tidak diketahui, pastikan kultur Anda sudah beberapa hari. Kultur yang masih muda dan segar belum mengembangkan kapsul.

Pewarnaan Tahan-Asam: Identifikasi Sel yang Tahan Asam

1. Lakukan sapuan bakteri, seperti yang dibahas pada Gambar 3-52 di halaman 150 buku panduan laboratorium Anda.
2. Tempatkan selembar kecil kertas bibulous di atas sapuan dan jenuhkan kertas dengan karbol fuchsia.
3. Panaskan slide dengan lembut di atas pembakar Bunsen selama 5 menit. Pastikan untuk tetap menjaga kertas bibulous tetap jenuh dengan karbol fuchsia selama pemanasan. Jika slide mengeluarkan uap, itu normal; jika berhenti mengeluarkan uap, tambahkan lebih banyak karbol fuchsia!
4. Angkat kertas bibulous dari slide, dan bilas lembut slide dengan air. Buang kertas bibulous yang sudah dipakai ke tempat sampah. JANGAN meninggalkan kertas bibulous bekas di wastafel atau saluran air!
5. Decolorize slide dengan asam-alkohol sampai air rinsatnya bening.
6. Bilas lembut slide dengan air.
7. Berkontras dengan metilen biru selama 2 menit.
8. Bilas lembut slide dengan air.
9. Keringkan slide dengan hati-hati menggunakan kertas bibulous.
10. Amati slide di bawah mikroskop, menggunakan teknik mikroskop yang benar. Sel asam-tahan akan berwarna fuchsia. Sel tidak asam-tahan akan berwarna biru.

Pewarnaan Spora: Mengungkap Spora dan Sel Induk

1. Lakukan apusan bakteri dari Bacillus atau organisme yang ingin Anda warnai.
2. Tempatkan selembar kecil kertas bibulous di atas apusan. Jenuhkan kertas dengan malachite green.
3. Panaskan slide dengan lembut di atas pembakar Bunsen selama 5 menit. Pastikan untuk tetap menjaga kertas bibulous tetap jenuh dengan malachite green selama pemanasan. Jika slide mengeluarkan uap, itu normal; jika berhenti mengeluarkan uap, tambahkan lebih banyak malachite green!
4. Angkat kertas bibulous dari slide, dan bilas lembut slide dengan air. Buang kertas bibulous yang sudah dipakai ke tempat sampah. JANGAN meninggalkan kertas bibulous bekas di wastafel atau saluran air!
5. Berkontras dengan safranin selama 2 menit.
6. Bilas lembut slide dengan air.
7. Keringkan slide dengan hati-hati menggunakan kertas bibulous.
8. Amati slide di bawah mikroskop, menggunakan teknik mikroskop yang benar. Spora akan berwarna hijau. Sel induk akan berwarna merah.

Pelajari lebih lanjut tentang teknik pewarnaan sederhana, negatif, Gram, kapsul, asam-tahan, dan spora dalam mikrobiologi. Temukan langkah-langkahnya dan tips penting untuk hasil yang akurat.***