Pewarnaan Asam Cepat - Prinsip, Prosedur, Interpretasi, dan Contoh

Table of Contents

 

INFOLABMED.COM - Pewarnaan Asam Cepat - Prinsip, Prosedur, Interpretasi, dan Contoh. Ini adalah teknik pewarnaan diferensial yang pertama kali dikembangkan oleh Ziehl dan kemudian dimodifikasi oleh Neelsen.

 Ini adalah teknik pewarnaan diferensial yang pertama kali dikembangkan oleh Ziehl dan kemudian dimodifikasi oleh Neelsen. 

Oleh karena itu, metode ini juga disebut teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen. Neelsen pada tahun 1883 menggunakan carbol-fuchsin milik Ziehl dan pemanasan, kemudian didekolorisasi dengan alkohol asam, dan diwarnai kembali dengan methylene blue. 

Dengan demikian, teknik pewarnaan Ziehl-Neelsen dikembangkan.

Tujuan utama dari pewarnaan ini adalah untuk membedakan bakteri menjadi kelompok asam cepat dan kelompok non-asam cepat.

Prinsip Pewarnaan Asam Cepat

1. Saat smear diwarnai dengan carbol fuchsin, itu melarutkan material lipoidal yang ada di dinding sel Mycobacterium, tetapi dengan pemberian panas, carbol fuchsin lebih jauh menembus dinding lipoidal dan masuk ke dalam sitoplasma. Setelah itu, seluruh sel tampak merah.
2. Kemudian smear didekolorisasi dengan agen dekolorisasi (3% HCl dalam alkohol 95%), tetapi sel asam cepat tahan karena adanya sejumlah besar bahan lipoidal di dinding sel mereka yang mencegah penetrasi larutan dekolorisasi. Organisme non-asam cepat tidak memiliki bahan lipoidal di dinding sel mereka sehingga mudah didekolorisasi, meninggalkan sel-sel tanpa warna.
3. Kemudian smear diwarnai dengan kontra pewarnaan, methylene blue. Hanya sel yang didekolorisasi yang menyerap pewarna kontra dan mengambil warnanya dan tampak biru, sementara sel asam cepat tetap merah.

Ringkasan Pewarnaan Asam Cepat

Application of	Reagent	Cell color
Acid fast	Non-acid fast
Primary dye	Carbol fuchsin	Red	Red
Decolorizer	Acid alcohol	Red	Colorless
Counter stain	Methylene blue	Red	Blue

Prosedur Pewarnaan Asam Cepat

1. Siapkan smear bakteri pada slide bersih dan bebas lemak, menggunakan teknik steril. Biarkan smear mengering udara dan kemudian pemanasan.
2. Penetapan alkohol: Disarankan ketika smear belum disiapkan dari sputum yang diobati dengan natrium hipoklorit (pemutih) dan tidak akan segera diwarnai. M. tuberculosis dibunuh oleh pemutih dan selama proses pewarnaan. Fiksasi panas dari sputum yang tidak diobati tidak akan membunuh M. tuberculosis sedangkan fiksasi alkohol bersifat bakterisidal.
3. Tutup smear dengan pewarna carbol fuchsin.
4. Panaskan pewarna sampai uap baru mulai muncul (sekitar 60 °C). Jangan memanaskan berlebihan. Biarkan pewarna yang dipanaskan tetap di slide selama 5 menit.
5. Bilas pewarna dengan air bersih. Catatan: Ketika air keran tidak bersih, bilas smear dengan air yang difilter atau air hujan yang dimasak bersih.
6. Tutup smear dengan asam alkohol 3% selama 5 menit atau sampai smear cukup didekolorisasi, yaitu pucat merah muda. Peringatan: Asam alkohol mudah terbakar, oleh karena itu gunakan dengan hati-hati jauh dari api terbuka.
7. Bilas dengan air bersih.
8. Tutup smear dengan pewarna malachite green selama 1-2 menit, menggunakan waktu lebih lama saat smear tipis.
9. Bilas pewarna dengan air bersih.
10. Lap bagian belakang slide bersih, dan letakkan di rak pengering untuk mengering secara alami (jangan mengeringkan dengan tisu).
11. Periksa smear di bawah mikroskop, menggunakan lensa objektif 100X minyak.

Interpretasi Pewarnaan Asam Cepat

Foto : microbiologyinfo.com

• Asam cepat: Merah terang hingga ungu intensif (B), batang merah lurus atau sedikit melengkung, terjadi sendirian atau dalam kelompok kecil, mungkin terlihat seperti mutiara.
• Non-asam cepat: Warna biru (A)

Contoh Pewarnaan Asam Cepat

Visualisasi Mycobacterium tuberculosis menggunakan pewarnaan Ziehl-Neelsen. Sumber: Wikipedia

• Asam cepat: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
• Bakteri non-Mycobacterial: Nocardia
• Parasit Coccidian: Cryptosporidium