Prinsip Pengecatan Lactophenol Cotton Blue (LPCB)

Table of Contents

 

Hasil pewarnaan LPCB. (Foto : researchgate)

INFOLABMED.COM - Pengecatan Lactophenol Cotton Blue (LPCB)  bekerja berdasarkan prinsip membantu identifikasi dinding sel jamur.

Jamur adalah organisme eukariotik  yang memiliki karakteristik makroskopis dan mikroskopis. 

Dinding sel spora jamur terbuat dari kitin,  yang komponennya diwarnai oleh larutan Lactophenol Cotton Blue untuk identifikasi.

Larutan lactophenol cotton blue  berfungsi sebagai larutan penjepit dan agen pewarna. Larutan ini bening dan berwarna biru, terdiri dari tiga reagen utama:

• Phenol: Bertindak sebagai disinfektan dengan membunuh organisme hidup.
• Asam laktat: Untuk menjaga struktur jamur.
• Cotton blue: Untuk mewarnai kitin pada dinding sel jamur dan struktur jamur lainnya.

Pewarnaan ini akan memberikan penampilan biru pada jamur,  seperti spora jamur dan struktur jamur seperti hifa.

Reagen Pengecatan Lactophenol Cotton Blue (LPCB)

Persiapan 50ml larutan pewarna Lactophenol Cotton Blue terbuat dari:

• Air suling 50ml
• Cotton Blue (Aniline Blue) 0,125g
• Kristal Fenol (C6H5O4) 50g
• Gliserol 100ml
• Asam laktat (CH3CHOH COOH) 50ml
• 70% etanol

Persiapan Larutan Lactophenol Cotton Blue

Larutan Lactophenol Cotton Blue disiapkan selama dua hari, membiarkan reagen tetap tidak terganggu untuk memungkinkan pelarut dan pematangan.

Hari 1: Larutkan cotton blue dalam air suling dan biarkan istirahat semalaman. Ini menghilangkan zat pewarna yang tidak larut.

Hari 2: Menggunakan sarung tangan pelindung, tambahkan kristal fenol ke dalam asam laktat dalam gelas beker dan aduk menggunakan pengaduk magnetik hingga kristal larut. 

Tambahkan gliserol. Saring Cotton blue dan air suling ke dalam larutan fenol + gliserol + asam laktat dan aduk. Simpan pada suhu ruangan.

Prosedur Pengecatan Lactophenol Cotton Blue (LPCB)

Pada slide kaca mikroskop yang bersih, tambahkan tetes alkohol 70%. Tambahkan spesimen jamur ke tetes alkohol menggunakan pemegang steril seperti lingkaran inokulasi (dari medium padat), tergantung pada sampel yang digunakan. 

Teas spesimen jamur dari alkohol menggunakan pemegang jarum, pastikan sampel mencampur dengan baik dengan alkohol.

Menggunakan pipet, tambahkan satu atau dua tetes Larutan Lactophenol Cotton Blue (disiapkan sebelumnya) sebelum alkohol mengering. 

Tutup pewarna dengan penutup steril yang bersih tanpa membuat gelembung udara pada pewarna. Periksa pewarna mikroskopis pada 40X, untuk mengamati spora jamur dan struktur jamur lainnya.

Hasil dan Interpretasi LPCB

Spora jamur, hifa, dan struktur buah menghasilkan warna biru, sedangkan latar belakang berwarna biru muda.

Contohnya,

• Aspergillus niger akan memberikan warna biru muda pada hifa dan struktur buah dengan latar belakang biru muda.
• Trichophyton mentagrophytes juga akan memberikan warna biru muda pada hifa dan struktur buah dengan latar belakang biru muda.

Dengan metode ini, kita dapat dengan jelas mengidentifikasi jenis jamur dan struktur jamur yang ada dalam sampel.

Dengan informasi lengkap mengenai prinsip dan prosedur Pengecatan Lactophenol Cotton Blue (LPCB), Anda dapat menggali lebih dalam ke dalam dunia mikroskopi dan identifikasi jamur. 

Semoga artikel ini bermanfaat dalam mengembangkan pemahaman Anda tentang teknik penting ini.***