Prosedur Pemeriksaan WANTAI TB-IGRA Metode ELISA

Table of Contents

 

Sumber : Tokopedia

INFOLABMED.COM -  Pengambilan sampel darah adalah langkah penting dalam uji tuberkulosis QFT-Plus.

 Prosedur ini mirip dengan QFT-Plus, namun ada perbedaan penting dalam hal pengambilan langsung ke tabung inkubasi. 

Sebaliknya, sampel darah diambil ke dalam tabung heparin litium dan kemudian ditransfer ke dalam tabung N, T, dan P. Satu mililiter sampel darah utuh ditransfer ke masing-masing tabung uji. 

Tabung-tabung ini kemudian ditempatkan langsung dalam inkubator pada suhu 37 °C ±1 °C dalam waktu 2 jam, dan diinkubasi selama 20–24 jam. 

Langkah-langkah ini dijelaskan di bawah ini (3) dan ditunjukkan dalam Gambar A2.2.1 (hingga inkubasi) dan Gambar A2.2.2 (setelah inkubasi).

Alat dan Bahan yang dibutuhkan untuk Uji WANTAI TB-IGRA

Pabrikan menyediakan pelat ELISA, reagen uji (tabung N, T, dan P), dan standar. Komponen kit ini harus disimpan dalam lemari pendingin pada suhu 2–8 °C. 

Untuk menjamin kinerja maksimal kit TB-IGRA ini, bahan-bahan harus dilindungi dari kontaminasi oleh mikroorganisme atau bahan kimia selama penyimpanan. Bahan lain yang diperlukan tetapi tidak disediakan dicantumkan di bawah ini.

Perlengkapan yang diperlukan di laboratorium untuk WANTAI TB-IGRA:

• Inkubator kering atau bak air, 37 °C ±1 °C.
• Pengocok mikro untuk melarutkan dan mencampurkan konjugat dengan sampel.
• Pembaca pelat mikro, satu panjang gelombang 450 nm atau dua panjang gelombang 450 nm dan 630 nm.
• Sistem penyedotan dan pencucian pelat mikro.
• Pengatur waktu.
• Wadah limbah yang sesuai untuk bahan yang mungkin terkontaminasi.

Bahan yang diperlukan di laboratorium untuk WANTAI TB-IGRA:

• Air suling segar atau deionisasi.
• Sarung tangan sekali pakai.
• Tampah V berbentuk huruf V sekali pakai.
• Sistem dispensasi atau pipet (tunggal atau multichannel) dan ujung pipet sekali pakai.
• Tisu penyerap atau handuk bersih.

Langkah 1. Pengambilan Sampel

• Setiap tabung harus diberi label dengan benar.
• Untuk setiap pasien, sampel darah utuh harus diambil melalui venipunktur ke dalam tabung heparin litium, dan volume yang diambil harus minimal 4 mL. Tabung tersebut harus dikocok dengan baik; kemudian dapat disimpan pada suhu 20–27 °C selama maksimal 16 jam sebelum langkah pengisian sampel.

Langkah 2. Pengisian Sampel

• Setiap tabung harus diberi label dengan benar.
• Tabung heparin litium harus dibalik perlahan tiga hingga lima kali untuk mencampur sampel.
• Selanjutnya, 1 mL sampel darah utuh harus diambil dan dimasukkan ke masing-masing tabung N, T, dan P.
• Tabung N, T, dan P harus dibalik perlahan tiga hingga lima kali untuk mencampur sampel.

Langkah 3. Inkubasi

• Segera setelah dicampur, tabung N, T, dan P harus ditempatkan dalam inkubator pada suhu 37 °C.
• Tabung-tabung harus diinkubasi dalam posisi tegak selama 22±2 jam.

Langkah 4. Sentrifugasi

• Setelah inkubasi, semua tabung harus disentrifugasi selama 10 menit pada 3000–5000 rpm, kemudian supernatan harus disedot.

Gambar A2.2.1. WANTAI TB-IGRA workflow – sample preparation and incubation

Langkah 5. ELISA

Untuk ELISA, tambahkan 20 mL larutan pengenceran sampel ke sumuran-sumuran mikroplak, kecuali sumur Blank. 

Tambahkan 50 mL sampel (supernatan), ditambah 50 mL larutan standar ke dalam sumuran-sumuran yang sesuai kecuali sumur Blank, campur dengan mengetuk lembut pelat, kemudian diinkubasi selama 60 menit, setelah itu tambahkan reagen peroksidase lobak besar. 

Semua sumuran kemudian diinkubasi selama 60 menit lagi. Setelah itu, sumuran-sumuran dicuci setidaknya lima kali, idealnya menggunakan mesin cuci pelat otomatis. 

Akhirnya, tambahkan warna A dan warna B, kemudian semua sumuran diinkubasi selama 15 menit lagi. 

Reagen akhir ditambahkan untuk menghentikan aksi kolorimetri dan kemudian kepadatan optik dibaca menggunakan pembaca ELISA mikroplak.

Gambar A2.2.2.WANTAI TB-IGRA workflow – testing procedures after incubation

INTERPRETASI HASIL UJI  WANTAI TB-IGRA

Interpretasi hasil uji didasarkan pada kalibrasi kurva standar dengan menggunakan serangkaian larutan standar interferon-gamma yang telah diencerkan, lalu memplotkan nilai-nilai untuk sumur positif, negatif, dan antigen TB pada kurva standar.

 Pabrikan merekomendasikan penggunaan kriteria yang ditunjukkan dalam Tabel A2.2.1 saat menafsirkan hasil uji WANTAI TB-IGRA (3).

Table A2.2.1. Interpretation of WANTAI TB-IGRA test results

Keterangan :

a = Konsentrasi tabung kultur pengujian (T)

b = Konsentrasi tabung kontrol latar belakang (N)

c = Konsentrasi tabung kontrol positif (P)

Dengan demikian, kami telah memberikan panduan lengkap tentang penggunaan WANTAI TB-IGRA. Semoga informasi ini bermanfaat untuk Anda.***