Mengenal Lebih Jauh Teknik ELISA indirect

Gambar. ELISA Indirect (Santosa, 2020)

Teknik ELISA indirect digunakan untuk mendeteksi antibodi sehingga diperlukan antigen yang spesifik. Dalam melakukan pemeriksaan dengan teknik ELISA direct yang diperlukan adalah antigen spesifik (monoclonal), antibodi yang dicari pada sampel, antibodi sekunder berlabel enzim, substrat dan stop solution. Secara ringkas tahapan teknik ELISA indirect untuk mengukur antibodi pada sampel yaitu ditambahkan pengenceran standar ke dalam plate microtiter dan pada well berikut ditambahkan sampel yang akan dideteksi konsentrasi antibodinya. Selanjutnya di inkubasi untuk dapat menghasilkan komplek antigen antibodi secara optimal, dilakukan pencucian untuk menghilangkan sisa antibodi yang tidak berikatan, selanjutnya ditambahkan antibodi sekunder berlabel enzim sehingga akan terjadi ikatan antigen antibodi dengan antibodi yang berlabel enzim, di inkubasi sesuai waktu pada kit, kemudian dicuci. Substrat ditambahkan untuk dapat mengubah enzim dan kemudian menghasilkan presipitat warna dan ditentukan konsentrasinya. Dilakukan pembacaan dengan ELISA reader, dikuantifikasi menggunakan kurva expert menggunakan absorbansi enceran standar (Aydin, 2015).

Teknik ELISA indirect memiliki kelemahan yaitu waktu pengujian relative lama dan metoda imobilisasi antigennya non spesifik sedangkan kelebihan dari ELISA indirect yaitu lebih sensitive dan banyak produk variasi antibodi sekunder (Gan & Patel, 2013).

Sumber :

AydiAydin, S. (2015) ‘A short history, principles, and types of ELISA, and our laboratory experience with peptide/protein analyses using ELISA’, Peptides, 72, pp. 4–15. doi: 10.1016/j.peptides.2015.04.012.

Gan,Gan, S. D. & Patel, K. R. (2013) ‘Enzyme immunoassay and enzyme-linked immunosorbent assay’, Journal of Investigative Dermatology, 133(9), pp. 1–3. doi: 10.1038/jid.2013.287.

SantSantosa, B. (2020) Teknik Elisa. Metode Elisa Untuk Pengukuran Protein Metallothionein Pada Daun Padi Ir Bagendit.

KLIK

DONASI VIA DANA ke 085862486502 Bantu berikan donasi jika artikelnya dirasa bermanfaat. Donasi Anda ini akan digunakan untuk memperpanjang domain www.infolabmed.com. Donasi klik Love atau dapat secara langsung via Dana melalui : 085862486502. Terima kasih.